猪的人工授精技术

猪的人工授精技术

鑫双宝生物科技有限公司
猪的人工授精技术 采取猪的人工授精技术有许多好处:
一是能提高种公猪的利用率.
您本交配种,1,头公猪一般只能负担20—25头母猪,人工授精配种,工头公猪可负担200—300头母猪,甚至上千头母猪.
二是能充分发挥优良种公猪的作用.
三是可以扩大种公猪的配种范围和解决公母体重相差悬殊的配种困难.四是公母猪不直接接触,有利于防疫和减少疫病传播.五是能大量节省饲养管理费用.一个千头母猪的猪场,采用人工授精要比本交,一年减少公猪饲养费7万元.因此,应大力推广应用猪的人工授精技术.
(1)猪人工授精的条件设施与用品:
①房屋:需砖(石)瓦结构,水泥地面,白墙壁房屋2间,每间10—15平方米.一间用于采(输)精和洗涤器材,一间用于精液处理.
②假台猪:把一根直径20厘米,长110一120厘米的圆木,两端削成弧形,固定于四条能上下升降的支柱上,支柱下端可以埋在地里或固定在大小合适的木板或铁板上,以便于挪动.在圆木上面铺一层稻草或草袋子,再覆盖一张熟过的猪皮.组装好的假台猪一般后躯高65—75厘米,前躯高55—65厘米,前低后高,相差lo厘米为宜.具体高度可按公猪大小调节确定.
⑧仪器和用品:个体户猪场或基层猪人工授精站至少需要具备的各类物品见表6—8.
品 名  规 格  用 途  数 量
1.一般设备和用具
显微镜
300-600倍
精液品质检查
天 平
0.01-100克
称量药品
1
计数机
4-6位数码手揿式
精子计数
1
大铝锅
口径32厘米以上
灭菌
1
电炉
800W
配稀释液
1
煤气罐
15公斤
灭菌
1
广口保温瓶
1000毫升
采精
2
小口保温瓶
1000毫升
贮装精液
2
暖水瓶
日用品
盛热水
2
搪瓷盘
大号,中号
盛器械
各1
方瓷缸
带盖
盛器械
1
药 匙
角质
取药品
4
镊 子
光头
夹取器械
2
剪 子
手术用
剪纱布等
1
搪瓷漏斗
直径8-10厘米
灌水
1
搪瓷量杯
500-1000毫升
灌水
1
塑料洗瓶
500毫升
配稀释液冲洗玻璃仪器
2
瓶刷

洗刷
2
镜头纸

擦显微镜镜头
2
滤 纸
定性
配稀释液过滤
2
输精胶管
猪用
输精
30
2.玻璃仪器

温度计
100℃
测精液,稀释液温度
4
烧 杯
250毫升

2
三角烧瓶
250毫升
配稀释液
2
量 筒
500毫升
配稀释液
2
玻璃漏斗
口径4-8厘米
配稀释液
2
放水瓶(龙头瓶)
10000毫升
盛蒸馏水
1
载玻片

精液品质检查
50
盖玻片

精液晶质检查
2
培养皿
大号
装盖玻片载玻片等
4
玻璃棒
长短各种规格
配稀释液
4
广口试剂瓶
500mi
盛药品试剂
4
玻璃注射器
30mi或50mi
输精
4
血球计数板
希里格氏式
检查精子浓度
1
3.化学药品

葡萄糖

配稀释液
1000克
二水柠檬酸钠

配稀释液
500克
L--胺四乙酸二钠

配稀释液
500克
青霉素,链霉素

配稀释液
各50支
酒 精

消毒
1000毫升
高锰酸钾

消毒
500克
蒸馏水

配稀释液
10000毫升
生理盐水

制棉球
[0X500毫升
去污粉

洗涤
2X500克
滑石粉

润滑乳胶手套
1000克
若附近购买不到蒸馏水,需配备蒸馏器自制或自行安装蒸馏装置制取,也可购买500m1瓶装注射用水,但较贵.玻璃仪器,化学药品等易耗损的需及时补充.化学药品栏列出的是配制"葡一柠一乙"常温保存稀释液需要的试剂和药品,如采用其它配方,则要作相应的改变.其它日常用品也需具备.包括肥皂,洗衣粉,乳胶手套,工作服,毛巾,台布,脱脂棉1c纱布,脸盆,塑料桶等.
(2)器材的洗涤和灭菌:
①器材的洗涤:要用五盆沉淀滤过的温开水,其顺序是(1)温肥皂水;2)1%的重曹水或面碱水;(3),(4),(5)沉淀滤过的温开水.按上述顺序洗涤下列器材:精液滤过布,玻璃器材,布类(先洗净的,后洗脏的).先用肥皂水和碱水洗净污垢,后用温开水漂洗干净,洗后在室内凉干.把输精胶管装在纱布袋里悬挂起来,玻璃器材装在瓷盘内盖好,最后清扫地面和处理缮后.②器材的蒸气灭菌:主要用于布类:台布,精液滤过布,包输精器的白布,纱布,擦手毛巾;玻璃类:集精瓶,精液瓶,稀释液瓶等;橡胶类:输精胶管,胶圈,封闭注射器的小胶帽等的消毒.输精胶管应用布一根根缠好直接放到灭菌器中,否则易弯曲影响使用.灭菌温度要求达到98,C以上,灭菌时间30分钟.⑧器材的酒精消毒:玻璃器材,橡胶器材和采精用的塑料手套在临用前还要用酒精棉进行一次涂擦消毒,待酒精充分挥发后使用.
(3)采精:
①调教种公猪:训练公猪爬跨假台猪可用以下方法:用发情母猪的尿或阴道里的粘液,最好能取到刚与公猪交配完的发情母猪阴道里的粘液,或从阴门里流出来的公猪精液和胶状物,涂在假台猪的后躯上,引诱公猪爬跨.
以上方法对于一般性欲较强的公猪足以解决问题.但有些性欲较弱的公猪,用上述方法不易训练成功,可将发情旺盛的母猪赶到假台猪旁,让被调教的公猪爬跨,待公猪性欲达到高潮时把母猪赶走,再引诱公猪爬跨假台猪,或者直接把公猪由母猪身上抬到假台猪上及时采精.有极个别公猪用这一方法还不能成功,就可用一头发情小母猪绑在假母猪的后躯下面,引诱公猪爬跨假台猪.当公猪爬上假台猪后应及时采精,一般经过3-5次调教都可成功,调教成功后要连采几天,以巩固建立起的条件反射,待完全以假当真后即可进行正常的采精.调教好的公猪不准再进行本交配种.调教公猪要耐心,调教室内须保持肃静,注意防止公猪烦躁咬人或与其它猪相互咬架.
②采精准备:采精室要清扫干净,保持清洁无尘,肃静无干 扰,地面平坦不滑.夏季采精宜在早晨进行.冬季寒冷,采精室内温度要保持在15℃以上,以防止精液因冷击或多次重复升降温而降低精液质量.采精时用于收集精液的容器除了专用的集精瓶外,也可用烧杯和广口塑料瓶代替,寒冷季节使用广口保温瓶效果很好.冬季寒冷,集精瓶及过滤纱布要搞好保温,具体方法是:将已灭菌的过滤纱布用已消毒过的手握干灭菌时吸入的水分,放入已消毒过的集精瓶(广口保温瓶)内,倒入适量热的5%葡萄糖溶液或稀释液,使温度升高至40-42℃后,手伸入集精瓶内,用纱布擦试集精瓶内壁四周,然后握干,倒掉升温液,迅速展开纱布,蒙在集 精瓶瓶口,并使瓶口中部纱布位置尽量下陷.假台猪的后躯部和种公猪的阴茎包皮,腹下等处,用o.l%高锰酸钾水溶液擦洗干净,采精员要修短指甲,洗净手,戴上塑料手套,用75%的酒精棉球彻底涂擦消毒,待酒精挥发后即可采精.
③采精操作:当公猪爬上假台猪后,按采精人员的操作习惯,蹲在假台猪右(左)后侧,在公猪抽动几次阴茎挺出后,采精人员迅速以左(右)手握成筒形(手心向下)护住阴茎,并以拇指顶住阴茎前端,防止擦伤.待阴茎在手中充分挺实后,即握住前端螺旋部,握的松紧以阴茎不致滑脱为度.然后,用左(右)手拇指轻微拨动龟头,其它手指则一紧一松有节奏的协同动作,使公猪有与母猪自然交配的快感,促其射精.公猪开始射出的多为精清,且常混有尿液及脏物,不宜收集,待射出较浓稠的乳白色精液时,立即以右(左)手持集精瓶,在稍离开阴茎龟头处将射出的精液收集于集精瓶内.室温过低时,需使阴茎龟头尽量置入集精瓶内.同时用左(右)手拇指随时拨除公猪排出的胶状物,以免影响精液滤过.公猪射完一次精后,可重复上述手法促使公猪二次射精.一般在一次采精过程中可射精2-3次.待公猪射精完毕退下假台猪时,采精员应顺势用左(右)手将阴茎送入包皮中.切忌粗暴推下或抽打公猪.并立即把精液送到处理室.在采精过程中,要随时注意安全,防止公猪突然倒下踩,压伤采精员.
(4)精液处理:精液处理室的温度要保持在15℃以上.采取的精液连同精液瓶应迅速置于28-30℃的恒温水中,并立即进行检查处理.
①精液检查:精液检查评定的主要项目有精液量,色泽,气味,精子活力,精子密度,精子存活时间和精子畸形率.
②精液量,色泽和气味:集精瓶没有刻度时,可事先以水代替精液,测定不同容积下对应于0-100℃水温计的刻度,制成换算表,据此可间接测定每次的采精量.也可用量杯或带有刻度的烧杯测定,但较麻烦.公猪的一次射精量一般为209-300毫升(视品种和个体而异),多者可达700毫升以上.猪的精液正常色泽为乳白色或灰白色,略有腥味.如果精液呈红褐色,可能混有血液;如呈黄,绿色有臭味,则可能有尿液或脓汁.这样的精液不能使用,应立即寻找原因,如属种公猪生殖器官炎症引起的,要及时进行治疗.
③精子活力:精子活力是以直线前进运动的精子占总精子数的比率来确定的.一般采取"lo级制评分法"进行评定.检查时,先用灭菌的细玻璃棒蘸取原精液一滴(高粱粒大小),点在清洁的载玻片上,盖上盖玻片,在400倍的显微镜下检查.检查时光线不宜太强,显微镜的载物台,载玻片和盖玻片的局部温度应保持在35·C左右.精液处理室温度过低时,显微镜应置于保温箱内.保温箱可用木板自行制做.更简单一点也可用硬纸板制做.尺寸要求是长36厘米X宽27厘米X高28厘米.箱盖前半部分用玻璃板,后半部分用硬纸板.距硬纸板左边16厘米处开一圆形口,以与显微镜镜筒吻合.两侧距后面13厘米,上面5厘米处各开一边长11厘米的正方形口,以便操作时两手伸入保温箱.前面下部正中开一圆形小孔,孔的大小以使带开关的灯头从内向外插出并保持一定的松紧度为宜.右侧方形开口前开一小圆孔,可由此插入温度汁.使用时如灯泡热源达不到要求,可放入2个或3个盛装有热水的玻璃瓶补充.精子活力的评定在显微镜下靠目力估测.直线前进运动的精子占100%则评定为1分;90%评为0.9分;80%评为0.8分;以
此类推.猪精子的活力一般不应低于0.7.常温精液输精,活力低于0.5的不宜使用.
④精子密度:精子密度是指每毫升精液中含有精子数的多少,通常采用目测法和计算法两种评定方法.目测法:根据显微镜视野中精子的稠密程度和间隙大小进行估测.分为密,中,稀三级."密级":精子之间空隙很小,容纳不下一个精子;"中级":精子间有一定空隙,能容纳1-2个精子;"稀级":精子之间的空隙很大,能容纳2个以上精子.通常认为,猪精液每毫升含精子3亿以上为密级;l一3亿为中级;l亿以下为稀级.目测法的主观性较大,不够精确,所以最好应用计算法来评定精子密度.计算方法:采用血球计数板计数一定容积稀释精液中的精子数,再换算成精子密度.
⑤清洗器械:先将血球计数板及盖玻片用蒸馏水冲洗,使其自然干燥.血吸管先用蒸馏水冲洗,再用95%酒精清洗,最后用乙醚清洗.试管及吸管洗净后须经烘干.
⑥精液稀释的操作:
用1毫升吸管准确吸取3%NaCl0.2毫升,注入小试管中.根据稀释倍数的要求,再用血吸管吸出10或20微升NaCl溶液弃去.用血吸管吸取精液至刻度10微升或20微升处.用纱布擦去吸管尖端附着的精液,将精液注入到小试管中.这样原精液就被稀释了20或10倍.用拇指按住小试管口,振荡2-3分钟使其混合均匀.
⑦精子的计数:将擦洗干净的血球计数板置于显微镜载物台上,在计算室上盖上盖玻片.将试管中稀释好的精液,滴一滴于计算室上盖玻片的边缘,使精液自动渗入计算室.注意不要使精液溢出于盖玻片之外,也不可因精液不足而致计算室内有气泡或干燥之处,如果出现上述现象应重新再做.静置3分钟,以400-600倍显微镜检查.统计出计算室的四角及中央共5个中方格即80个小方格内的精子数.统计每小方格内的精子,只数小格内及压在左线和上线的精子.精子密度即每毫升精液所含精子数的计算方法为:稀释20倍时,80个小方格内的精子总数乘以1-00万即是;稀释1-0倍时,乘以50万即是.为了减少误差,必须进行两次精子计数,如果前后两次误差大于1.0%,则应作第三次检查.最后在3次检查中取两次误差不超过10%的,求其平均数,即为所确定的精子数.
⑧精子存活时间:将原精液按l:1-2稀释,分装到10个灭菌后用稀释液冲洗过的小试管中封好,待温度降至15-20℃时再放入同样温度的容器中贮存.然后每隔12小时取一瓶升温至35℃,镜检精子活力.重复上述检查直至小试管中的精子全部死亡为止.每次检查的时间和精子活力要记录下来.精子存活时间计算公式:精子存活时间=各次检查间隔时间的和一最后一次间隔时间的一半二检查次数X1-2-6,精子存活指数计算公式:
⑨精子畸形率的检查:精子畸形率为畸形精子占全部精子的比率.其检查方法如下:用清洁的细玻璃棒蘸取一滴精液,点在清洁载玻片上,用另一块载玻片的一端与精液轻轻接触,然后以30一40.度的角度轻微而均匀地向一方推进制成抹片,然后对抹片进行染色和镜检,其程序是:涂片一自然干燥一96%酒精浸泡3-5分钟固定一漂洗一阴干一美蓝浸泡3-5分钟染色一阴干→镜检.把染色阴干后的精液涂片放在600倍的显微镜下检查.计算畸形精子占精子总数的百分率.精子畸形率超过18%的精液不能使用.
⑩精液稀释的配方:稀释精液的目的是为了增加精液数量,扩大配种头数,延长精子的存活时间,便于保存和长途运输.稀释液的常用的配方有下列几种.奶粉稀释液:奶粉9克,蒸馏水土00毫升.葡柠稀释液:葡萄糖5克,柠檬酸钠0.5克,蒸馏水土00毫升."卡辅"稀释液:葡萄糖6克,柠檬酸钠0.35克,碳酸氢钠
0.12克,乙二胺四乙酸二钠0.37克,青霉素3万单位,链霉素10万单位,蒸馏水100毫升氨卵液:氨基乙酸3克加蒸馏水1.00毫升配成基础液,基础液70毫升加卵黄30毫升.葡柠乙液:葡萄糖5克,柠檬酸钠0.3克,乙二胺四乙酸0.1克,蒸馏水100毫升.蔗糖奶粉液:蔗糖6克,奶粉5克,蒸馏水100毫升.葡碳卵液:碳酸氢钠0.21克,葡萄糖4.29克,蒸馏水100毫升配成基础液,基础液80毫升加20毫升卵黄.
葡柠碳乙卵液:葡萄糖5.土克,柠檬酸钠0.18克,碳酸氢钠0.05克,乙二胺四乙酸0.16克,蒸馏水100毫升配成基础液,基础液97毫升加3毫升卵黄.以上8种除"卡辅"外,抗生素的甩量为青霉素1-000单位/毫升,双氢链霉素1.000微克/毫升.
另外国外三种常用稀释液如下: ,
BL一1液(美国):葡萄糖2.9%,柠檬酸钠l%,碳酸氢钠0.2%,氯化钾0.03%,青霉素1000单位/m1,双氢链霉素0.0l%.IVT液(英国):柠檬酸钠·2克,碳酸氢钠0.21.克,氯化钾0.04克,葡萄糖0.3克,氨苯磺胺0.3克,蒸馏水100毫升,混合后加热使之充分溶解,冷却后通入CO:约20分钟,使pH达到6.5.奶粉一葡萄糖液(日本):脱脂奶粉3.0克,葡萄糖9克,碳酸氢钠0.24克,o-氨基-对甲苯磺酰胺盐酸盐0.2克,磺胺甲基嘧啶钠0.4克,灭菌蒸馏水200毫升.需要指出的是,近年来的一些实验结果表明,庆大霉素,新霉 素,粘菌素,氯霉素,林肯霉素等的抑菌效果比传统使用的青霉素和链霉素要好.
上述各种稀释液的配制方法:按配方先将葡萄糖,奶粉及柠檬酸钠等溶于蒸馏水中,滤过后蒸气消毒30分钟,取出凉至38℃以下,再按各配方的需要分别加入新鲜卵黄,碳酸氢钠,乙二胺四乙酸二钠,抗生素搅拌均匀备用.
取用卵黄的方法:将新鲜鸡蛋擦洗干净,用酒精棉消毒,待酒精挥发完毕后,打开鸡蛋,倾倒于一张灭菌过,对折后打开的滤纸上,清除掉蛋清,用注射针头划破卵黄膜,沿折痕把卵黄倒入容器内,卵黄膜自然地留在滤纸上.稀释精液时,凡与精液直接接触的器材和容器,都必须经过消毒处理,其温度和精液温度要保持一致.使用前用少量同温稀释液洗 一遍所用的器材和容器,然后将稀释液沿瓶壁徐徐倒入原精液中,并轻轻摇动盛精液的容器.切勿将原精液往稀释液中倒,以免损伤精子.精液的稀释倍数一般为o.5-4倍.这主要决定于每次的输精剂量和输入的有效精子数.国外的输精剂量有高于国内的趋势,如荷兰每剂量80一100毫升,,含有效精子20亿.我国每次输精剂量由传统的50毫升减少到15-20毫升,每毫升有效精子数不低于1亿个.保证每毫升稀释后精液含1亿有效精子的最大稀释倍数=原精液密度X活率一土.
四精液保存:为了取用方便,最好把稀释精液分装在20毫升或30毫升(一个输精量)的小瓶内保存.要装满瓶,瓶内不留空气,瓶口要封严.保存的适宜温度为15℃一18℃.通常有效保存时间48小时左右.如果原精液晶质好,稀释,保存等处理得当可达72小时.
⑩精液运输:将上述分装好的稀释精液瓶包以毛巾,棉纱布或泡沫塑料等物,以免精液在运输中振荡造成精子受伤.外界温度在10℃以下或20℃以上时,要应用广口保温瓶或保温箱运输,把精液瓶放入盛有15℃一18'C水的保温容器内,以防止精液温度的突然升高或下降.精液的运输时间要尽可能缩短,长途运输最好用摩托车,汽车或火车等,最长的运输时间不宜超过48小时,即通常的精液有效保存时间.
(5)输精:输精是人工授精的最后一个重要环节,要做好母猪适宜输精时机的判定,输精前准备和输精操作.
①输精时机的判定:母猪的发情期一般为3-5天,按母猪的典型征候可分为前,中,后三期.前期,母猪外阴部开始膨大,阴门内粘膜呈淡红色,精神不安,不时地走动呜叫,追随爬跨其它猪,但不让公猪爬跨配种,约l天时间.中期,外阴部膨大呈桃核形,阴门内粘膜潮红,继续走动不安,但有时发呆,两耳竖立颤动,用乒按压背部,母猪站立不动,能接受公猪爬跨,约1-2天.后期,外1凋部开始缩小,阴门内粘膜呈淡紫色,有时仍走动,爬跨其它猪,但不再让公猪爬跨,约1-2天.输精的最适宜时机是在整个发情中期.但有些母猪的发情征候不典型,容易错过适宜输精时机.目前,判定母猪输精时机的可靠方法是采用试情公猪,一般在母猪愿意接受公猪爬跨时输第一次,以后间隔18-24小时输第二次为宜.
②输精准备:输精员洗净手,把蒸煮消毒过的输精器材(30一50毫升的玻璃注射器和输精胶管)用少量稀释液冲洗一遍;把精液升温到35-38℃;用升至相同温度的注射器吸取1头份精液,如果在低温季节进行室外输精,在注射器和输精管外包以35-38℃的湿毛巾;用o.1%的高锰酸钾溶液消毒母猪外阴部.
⑧输精操作:输精员一手张开母猪阴门,一手持输精管插入阴道.先向斜上方推进10厘米左右,再向水平方向插进,边插边捻转,边抽送边推进,待插入30-40厘米左右(视母猪大小),感到再不能推进时,便可缓慢地注入精液.如果发现精液逆流,可暂停一下,活动输精管,再继续注入精液,直至输完,再慢慢地抽出输精胶管.为了避免输精后精液逆流,在输精过程中可按压母猪腰部,也可在输精结束时突然拉一下母猪的尾巴,或猛拍一下臂部.如果逆流严重,应立即重新输精.输精后的母猪不能急赶,应令缓缓行走,最好送单圈休息.背部,母猪站立不动,能接受公猪爬跨,约1-2天.后期,外1凋部开始缩小,阴门内粘膜呈淡紫色,有时仍走动,爬跨其它猪,但不再让公猪爬跨,约1-2天.输精的最适宜时机是在整个发情中期.但有些母猪的发情征候不典型,容易错过适宜输精时机.目前,判定母猪输精时机的可靠方法是采用试情公猪,一般在母猪愿意接受公猪爬跨时输第一次,以后间隔18-24小时输第二次为宜.